ВИЧ иммуноблот

  • Главная
  • Анализ крови
  • Венерология

Иммуноблот на ВИЧ позволяет обнаружить антитела к вирусным белкам, помещенным на специальную нитроцеллюлозную мембрану. Это высокоточное исследование, устанавливающее наличие фракций, в которых основные белки располагаются в виде небольших полос.

Оболочка вируса ВИЧ-1 содержит гликопротеины с молекулярной массой от 41 кд до 160 кд (килодальтона). Большое значение для проведения иммунного блоттинга имеет гликопротеин ВИЧ-2 с молекулярным весом от 32 кд до 140 кд. Белки сердцевины ВИЧ-1 и ферменты вируса представлены протеинами р17, р24, р55.

Возбудитель ВИЧ-2 состоит из белков, обозначаемых как р16, р25, р56. Они образуют его внутреннюю оболочку. В состав генома входят 6 регуляторных и 3 структурных гена. Нередко при делении клеток возникают генетические неточности и появляется несколько подтипов возбудителя.

Общая информация

Иммуноблот – что это такое? Для того чтобы распознать у человека ВИЧ-инфекцию, необходимо пройти метод лабораторного исследования сыворотки крови на присутствие антител. Методику иммуноблоттинга еще называют вестерн-блот (western blot). Ее используют для обнаружения вирусных инфекций человека, как дополнительный экспертный способ. Он необходим для подтверждения ИФА – лабораторного исследования, позволяющего определить в крови наличие ВИЧ-антител. Иммуноблоттингом перепроверяют положительный анализ ИФА. Он считается наиболее чувствительным, сложным и дорогим.

Тестирование в домашних условиях

Наиболее часто неверные показатели анализа обнаруживаются при проведении домашнего тестирования. Получается ложноположительный результат на ВИЧ по причине большого количества ошибок, в результате чего складывается неверное представление о действительном состоянии организма. Ошибочный итог может быть следствием нескольких причин:

  1. Нарушение правил хранения тест–системы;
  2. Нестерильность материала;
  3. Неверное количество крови для анализа;
  4. Наличие других факторов (состояние здоровья, особенности питания, вредные привычки).

Домашний тест на ВИЧ удобен тем, что дает возможность сохранить анонимность — не каждый человек готов предоставлять свои данные из–за опасения разглашения информации в случае обнаружения инфицирования. Но, как показывает практика, выполнение теста дома дает самый большой процент ложноположительного результата на ВИЧ.

Отчасти в этом виноваты сами «авторы» процедуры либо по собственной халатности, либо по незнанию правил подготовки к анализу и особенностей выполнения тестирования. Достаточно часто ложный показатель выдают просроченные ВИЧ–тесты.

Предназначение

Что это такое – иммуноблот? Это методика лабораторного исследования сыворотки крови на наличие антител к вирусу. Во время проведения исследования специалист предварительно разделяет белки вируса в геле и переносит их на нитроцеллюлозную мембрану. Предназначена процедура иммуноблоттинга для определения ВИЧ на разных стадиях. На первом этапе очищенный вирус от составных частей подвергают электрофорезу, а антигены, входящие в его состав, разделяют по молекулярному весу.

Вирус иммунодефицита человека размножается в живой клетке, встраивая в нее свою генетическую информацию. На этом этапе человек становится носителем вируса ВИЧ, если был заражен. Специфика заболевания в том, что оно долгое время может никак себя не проявлять. Вирус разрушает лимфоциты, поэтому иммунитет человека снижается, и организм становится неспособным противостоять инфекциям. Если ВИЧ грамотно и вовремя лечить, пациент проживет до глубокой старости. Отсутствие терапии неминуемо приводит к летальному исходу. С момента инфицирования, но без лечения, максимальный срок жизни составляет не более десяти лет.

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ инфекции

Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:

  1. Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
  2. Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
  3. Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
  4. Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
  5. Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.

Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.

Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.

Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:

  • неправильный забор биологического материала;
  • неправильное хранение биоптата;
  • неправильная транспортировка диагностических систем;
  • длительное хранение тест-системы.

На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.

После получения результатов исследования лабораторный работник должен выдать для врача заключение. Если диагностика проводилась в «период окна», он назначает повторное проведение диагностики спустя определенное время. В любом случае, чтобы поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», одного иммуноблота недостаточно. Необходима комплексная диагностика.

Особенности

Иммуноблот анализ – достоверный метод, который позволяет определить наличие антител к антигенам ВИЧ первого и второго типа. Если человек инфицирован, уже через две недели появляются антитела, которые могут обнаруживаться и намного позднее. Особенность ВИЧ в том, что количество антител быстро увеличивается и сохраняется в крови больного. Даже если они присутствуют, болезнь может не проявлять себя в течение двух и более лет. Метод ИФА не всегда точно определяет наличие заболевания, поэтому требуется подтверждение результатов с помощью иммуноблоттинга и ПЦР, если иммуноферментный анализ показал положительный результат.

Сроки определения противотрепонемных антител

Нужно знать, что ни один, даже самый точный метод, в том числе, иммуноблот, не позволит получить точных данных, если заражение сифилисом произошло несколько дней назад. Обусловлено это тем, что болезнетворные микроорганизмы находятся в инкубационном периоде на ранних этапах внедрения в организм, соответственно, иммунная система в указанные сроки не начинает продуцировать антитела, выявляемые в ходе проведения иммуноблота.

  • Продуцирование организмом антител IgM для борьбы с проникшей в организм сифилитической инфекцией начинается в период с седьмого по четырнадцатый день заражения сифилисом. Но вероятность обнаружения их в это время даже посредством высокоточных анализов крайне мала. Максимальной концентрации уровень антител достигает в период с шестой по девятую неделю инфицирования.
  • Полное исчезновение выявляемых анализом IgM происходит через три – шесть месяцев после курса терапевтического лечения. Если больной не получал лечение, подобное наблюдается через год – полтора после внедрения в организм сифилитической инфекции. Выявление антител возможно при первичном и вторичном периоде заболевания. При этом определение может быть исключено в том случае, если сифилис протекает в скрытой форме. Появление IgM после полного исчезновения говорит о повторном заражении или низкой эффективности лечения.
  • Выработка организмом специфических антител, отнесенных к классу IgG, начинается примерно через четыре – пять недель с момента внедрения бледной трепонемы в организм. В отличие от IgM, концентрация IgG постоянно увеличивается, достигая максимальной величины к двенадцати – двадцати четырем месяцам после инфицирования и сохраняясь на протяжении нескольких лет или всей жизни даже при условии успешного лечения.

Показания к назначению

Что это такое «иммуноблот» уже выяснили, но кому назначают данное исследование? Поводом сдать анализы на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) методом иммуноблоттинга становится положительный результат ИФА. Необходимо пройти через иммуноферментный анализ пациентам, которые будут оперироваться. Кроме этого, следует сделать анализ женщинам, планирующим беременность, а также всем, кто ведет беспорядочную половую жизнь. Назначают иммуноблоттинг пациентам с ВИЧ, если результаты ИФА вызывают сомнения. Поводом для обращения к врачу могут стать следующие тревожные симптомы:

  • резкое похудение;
  • слабость, потеря работоспособности;
  • расстройство кишечника (диарея), которое продолжается в течение трех недель;
  • обезвоживание организма;
  • лихорадка;
  • увеличение лимфатических узлов на теле;
  • развитие кандидоза, туберкулеза, пневмонии, токсоплазмоза, обострение герпеса.

Пациенту не нужно подготавливаться перед сдачей венозной крови. За 8-10 часов до исследования нельзя принимать пищу. Не рекомендуется за сутки до сдачи крови употреблять алкогольные и кофейные напитки, заниматься тяжелыми физическими упражнениями, испытывать волнение.

Стоимость

Сколько стоит анализ? Иммуноблот на ВИЧ не относится к дешевым исследованиям. В среднем, скрининговое обследование иммуноферментными методами стоит от 500 до 900 рублей. Иммуноблоттинг – это верификационное исследование, стоимость которого составляет от трех до пяти тысяч рублей. Более сложные методы стоят намного дороже. Например, за анализ полимеразной цепной реакции (ПЦР) нужно будет заплатить около 12000 рублей.


Смотреть галерею

Как проводится исследование?

Как проводят анализ ИФА? Иммуноблот положительный/отрицательный подтверждает или опровергает результаты иммуноферментного анализа. Процедура исследования достаточно простая. Специалист проводит забор венозной крови, по времени это занимает не более пяти минут. После взятия проб место укола следует дезинфицировать и заклеить пластырем. Забор проводят натощак, поэтому после процедуры не помешает съесть плитку горького шоколада или выпить сладкий горячий напиток.

Для того чтобы получить направление на бесплатный анализ в государственном медицинском учреждении, необходимо посетить врача-терапевта. В целом, иммуноблот не отличается от других исследований крови по способу забора. Методика исследования простая. Если в крови человека присутствует вирус, организм для его разрушения начинает вырабатывать антитела. Для каждого вируса существует свой набор белков-антигенов. Выявление этих антител и есть основа методики иммуноблоттинга.

Чтобы не стать заложником ложноположительного анализа

Анализ ИФА необходимо провести после сомнительного контакта через 6-12 недель. В этот период обнаруживаются антитела вируса иммунодефицита человека. В этом случае на 70% ложноположительный анализ можно исключить.

Перед сдачей крови на ВИЧ (ИФА) нужно не нарушать диету, не употреблять алкоголь, наркотики и не жить половой жизнью хотя бы за 2-3 недели до сдачи анализа на ВИЧ. Кровь сдается только натощак. Сколько врач возьмет крови, и сколько стоит анализ, а также срок годности анализа можно узнать непосредственно в медицинском центре. При имеющихся вирусных или инфекционных заболеваниях лучше анализ не сдавать, необходимо обратиться в лабораторию через 35-40 дней после выздоровления. При наличии других хронических заболеваний, следует сообщить врачу.

Даже если анализ оказался положительным, не нужно впадать в панику, возможно, он ложноположительный. Сколько месяцев должно пройти после первой сдачи?

Через 3-4 месяца анализ ИФА уже можно пересдать. У человека, в крови которого нет вируса иммунодефицита, результат будет гарантированно отрицательным.

Многих людей интересует вопрос о том, сколько живет ВИЧ? Вирус иммунодефицита человека, попадая на воздух, гибнет практически мгновенно. Погибает он при температуре выше 40°C. Поэтому если бы можно было подогреть кровь человека до такой температуры, ВИЧ был бы побежден, и не умирало бы столько людей, сколько на сегодняшний день погибает от вируса.

Трактовка результата

Самые распространенные методы диагностики инфекции ВИЧ – это иммуноферментный анализ и иммуноблот. Они ипользуются для определения в сыворотки крови антител к вирусу иммунодефицита. Наличие инфекции обычно подтверждают двумя тестами: скрининговым и подтверждающим. Интерпретация результатов исследования должна проводиться врачом, он же ставит диагноз и назначает лечение. Если иммуноблот положительный, это означает, что в организме человека присутствует вирус.

Положительный результат не должен стать поводом для самостоятельного лечения, так как у каждого пациента может быть своя картина заболевания. Качественный анализ включает скрининговый и вертификационный. Если у пациента не обнаружен вирус, то в результате указывают «отрицательно». При обнаружении методом скрининга проводят дополнительное вертификационное исследование. Иммуноблот – это анализ, который подтверждает или опровергает скрининг. Если на тест-полоске появляются потемнения на определенных участках (места локализации белков), ставят диагноз «ВИЧ». Если результаты вызывают сомнения, анализы проводят в течение трех месяцев.

Не допустить заражение вирусом иммунодефицита можно, если соблюдать определенные правила: избегайте случайных половых связей, используйте презерватив во время контактов, не принимайте наркотики. Если болезнь обнаружена у беременной женщины, важно четко соблюдать рекомендации лечащего врача, не забывать проходить обследования на предмет наличия вируса.

Линейный метод

Принцип иммуноблоттинга включает:

  1. Использование нативного вирусного вещества ВИЧ-формат или антигенов в формате Western -Blot.
  2. Соединение белков ВИЧ с отдельными антителами, выявленными в сыворотке крови.
  3. Процесс инкубации, происходящий с добавлением меченных антител к человеческим Ig.
  4. Расшифровку окрашенных полос.

Анализ позволяет врачу своевременно провести интерпретацию результатов исследования. Положительный блот расшифровывают как 2ENV+/- GAG+/POL, неопределенный — 1 ENV+/- GAG+/POL. Отрицательный результат предусматривает отсутствие полос.

Для выполнения анализа применяют рекомбинантный и лизатный иммуноблот. Исследование является специфичным и составляет 99,5%.

Может ли результат анализа быть расшифрован как ложный, интересуются больные. Полученные данные могут быть сформированы в результате стимуляции защитных сил организма (беременности, гемодиализа). При подозрении на острый ретровирусный синдром и контакт с больным ВИЧ-инфекцией пациенту рекомендуют сдать сыворотку на реакцию ПЦР. Повторное серологическое исследование подтверждается путем измерения вирусной нагрузки в представленном образе биологического материала.

Частые вопросы

Какие стадии включает иммуноблот?

  1. Подготовка стрипа.Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на «промокашку» избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.
  2. Исследование пробы.На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами. В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется – делается видимым.
  3. Трактовка результата.Наличие полос в на определённых участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.
  • Полоска А – Положительный контроль
  • Полоска В – Слабоположительный контроль
  • Полоска С – Отрицательный контроль
  • Полоска D – Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

Как расшифровать анализ?

Если ИФА показал наличие всех или почти всех антител к антигенам согласно данной тест-системы, это обозначает положительный анализ на ВИЧ. Если ответ после проведения второго серологического иммуноферментного анализа положительный, то необходимо провести иммуноблот. Расшифровка результатов его будет более верной. Если иммуноферментный анализ дал положительный результат, следующий анализ иммуноблота так же показал наличие ВИЧ, то ставится заключительный результат.

Иммуноблоттинг — дополнительный непрямой метод. Иммунный блоттинг в диагностике вич

Иммуноблот – это один из методов лабораторной диагностики, который широко используется в диагностике вирусных инфекций человека, в том числе и ВИЧ.

Иммуноблот считается наиболее точным методом, который превосходит даже ИФА (иммуноферментный анализ). То есть, результаты такого анализа являются окончательными, более точного способа для выявления вирусов в практической медицине, в настоящее время, не существует.

Как проводится исследование

С точки зрения пациента иммуноблот никак не отличается от любого другого анализа: берется венозная кровь, исследуется и получается результат. Но если вдаться немного подробнее методику, то она очень не простая, но все же попробуем разобраться.

Вначале, на заводе-производителе реактивов, берется «эталонный» вирус иммунодефицита человека. Затем при помощи специальной процедуры (электрофореза) в гелевой среде вирус разрушается до его мельчайших составляющих: белков (антигенов вируса). Затем при помощи самого блоттинга (от англ. промокания) частицы располагают на специальном материале — нитроцеллюлозе или нейлоновом фильтре, получается готовый к использованию индикатор, так называемый стрип. Стрип – это полоска, в которой антигены распределены в зависимости от своей молекулярной массы, в четкой последовательности, то есть каждому миллиметру бумаги соответствует определенный белок.

Как вы, возможно, знаете если в крови человека присутствуют вирусы, то организм начинает вырабатывать против их оболочек (определенных белков) антитела, при чем для каждого вируса имеется свой индивидуальный набор белков-антигенов. Выявление антител к белкам-антигенам в крови есть основа метода иммуноблот. Ведь если антитело сталкивается с антигеном, то они непременно взаимодействуют друг с другом – «прилипают».
Так вот, антигены находятся на стрип-полоске и в случае наличия в крови исследуемого подходящих антигенов они обязательно взаимодействуют друг с другом а в этом месте, на стрип полоске, проявится индикатор – появится плоска (как тест на беременность). Причем в конкретном месте полоски, таким образом врач поймет есть ли в крови набор белков характерных для того или иного вируса.

Так, к примеру, при наличии на полоске потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41 диагностируется ВИЧ, для других вирусов это будут совсем другой набор белков.

Нужно отметь, что иммуноблот позволяет точно установить наличие вируса только в том случае, если набор антител в крови является полным, то есть если белки gp160, gp120, gp41 присутствуют одновременно, то это 100% ВИЧ инфекция. А вот если хотя бы одного нет, к примеру: gp41 отсутствует, а есть только gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторения.

Имя ему СПИД Вячеслав Залманович Тарантул

Иммуноблоттинг — дополнительный непрямой метод

Кроме ИФА в определенных случаях для тестирования ВИЧ-инфекции используют процедуру, называемую «иммуноблоттинг» или «иммунный блоттинг» (иногда называют еще «вестерн-блот»). По рекомендации ВОЗ иммуноблотинг используется при диагностике ВИЧ-инфекции в качестве дополнительного экспертного метода, который должен подтверждать результаты ИФА. Обычно этим методом перепроверяют положительный результат при ИФА, поскольку он считается более чувствительным и специфичным, хотя более сложным и дорогим. Но прежде чем подписать окончательный приговор пациенту, врач должен убедиться полностью в правильности диагноза. Поэтому вопрос о сложности и дороговизне здесь не может быть решающим.

Как по назначению, так и по способу исполнения к иммунному блоттингу хорошо подходит известное выражение «вывести на промокашку». Иммунный блоттинг сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим разделением белков вируса в геле и их переносом на нитроцеллюлозную мембрану («промокашку»). Процедура иммуноблота состоит из нескольких стадий (рис. 27). Сначала предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов ВИЧ подвергается электрофорезу, при этом все входящие в состав вируса антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на «промокашку» избытка чернил) антигены переносят из геля на полоску нитроцеллюлозы или нейлонового фильтра, которые отныне содержат невидимый пока глазом спектр белков, характерный для ВИЧ. Далее на стрип наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т. п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им полосками белков-антигенов. В результате последующих манипуляций (подобных ИФА) результат этого взаимодействия визуализируется — делается видимым. В конечном итоге наличие полос на определенных участках стрипа подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определенным антигенам ВИЧ.

Иммунный блоттинг чаще всего используют для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции. ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум белкам оболочки ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp160, gp120, gp41) в сочетании или без реакции с другими белками результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование с использованием набора другой серии или другой фирмы. Для подстраховки, если

Рис. 27. Для проведения иммуноблотинга на первом этапе белки, содержащиеся в сыворотке крови, разделяют в геле по их молекулярной массе и заряду с помощью электрического поля (методом электрофореза в геле). Затем на гель накладывают нитроцеллюлозную или нейлоновую мембрану и «промокают» (это и есть блоттинг). Это осуществляют в специальной камере, которая позволяет осуществить полный пернос материала из геля на мембрану. B результате та картина расположения белков, которая была на геле, воспроизводится на мембране (блот), с которой можно далее легко манипулировать. Первоначально мембрану обрабатывают антителами к искомому антигену, а после отмывки несвязанного материала добавляют радиоактивно меченный коньюгат, который специфически связывается с антителами (как в ИФА). Местоположение образующегося комплекса «антиген-антитело — меченый коньюгат» определяют с помощью авторадиографии с использованием рентгеновской пленки. После ее проявления становится ясным, есть ли антигены в крови или их нет и после этого результат остается сомнительным, рекомендуется последующее наблюдение в течение шести месяцев (исследования продолжаются через каждые три месяца).

B настоящее время в РФ для использования при диагностике ВИЧ-инфекции рекомендовано использовать пять тест-систем, среди которых имеются как российские, так и зарубежные.

Из книги Анестезиология и реаниматология автора Марина Александровна Колесникова

11. Непрямой массаж сердца C–Circulation – обеспечение гемоциркуляции – непрямой массаж сердцаЗакрытый массаж сердца является наиболее простым и оперативным способом экстренного искусственного поддержания кровообращения. К закрытому массажу сердца следует приступать

Из книги Странности нашего тела. Занимательная анатомия автора Стивен Джуан

Какой дополнительный вес я наберу во время беременности и останется ли он после того, как ребенок родится? В среднем, женщина за период беременности набирает 9,9 кг. Она теряет 6,1 кг в течение часа после родов, избавляется от 1,6 кг за следующие 12 дней, а через 6 недель весит на

Из книги Методичка по первой помощи автора Николай Берг

НЕПРЯМОЙ МАССАЖ СЕРДЦА И СЕРДЕЧНО-ЛЕГОЧНАЯ РЕАНИМАЦИЯ В случаях, когда у пострадавшего остановились дыхание и циркуляция крови, необходимо немедленно приступить к сердечно-легочной реанимации, то есть сочетанию искусственной вентиляции легких и непрямого массажа

Из книги Как 100 % бросить курить, или Полюби себя и измени свою жизнь автора Давид Кипнис

Мой метод Я твёрдо решил бросить курить и рассчитывал добиться результата сам, без сложных подготовок и специальных курсов. У меня это получилось. И поверьте — всё оказалось значительно проще, чем я думал.После того, как я перепробовал разные методы бросить курить, я

Из книги Полный справочник по уходу за больными автора Елена Юрьевна Храмова

Непрямой массаж сердца Пострадавшего уложить на спину на жесткую поверхность (пол, асфальт, щит, длинный стол, жесткие носилки), запрокинуть ему голову. Предварительно освободив полость рта, сделать 5 вдуваний воздуха в рот или нос пострадавшего. Затем спасатель должен

Из книги Справочник неотложной помощи автора Елена Юрьевна Храмова Из книги КЕСАРЕВО СЕЧЕНИЕ: Безопасный выход или угроза будущему? автора Мишель Оден

Дополнительный урок Обзор Банка данных в поисках новых сведений о возможных долгосрочных последствиях рождения кесаревым сечением преподносит нам еще один поучительный урок. Никак нельзя обойти вниманием исследования, из которых следует, что всевозможные осложнения

автора Гэри Гриффин Из книги Как увеличить размеры мужского полового члена автора Гэри Гриффин

МЕТОД «V» Несколько лет назад у жителя штата Нью-Джерси Юджина Вискионе возникла не поддающаяся лечению болезнь пейрония (аномальное искривление пениса). Такой синдром может возникнуть в любое время и обычно связывается с травмой члена, особенно при половом

Из книги Библия секса автора Пол Джоанидис

Дополнительный материал к этой книге (Откровения наших читателей) Здесь мы разместили ответы на ваши вопросы, которые мы получили от вас по электронной почте на наш сайт в Интернете: www.goofyfootpress.com. Большинство из них вошло в этот материал. (Здесь несколько раз встречается

Из книги Йога-терапия. Новый взгляд на традиционную йога-терапию автора Свами Шивананда

65. Сахаджа-басти-крийя-1Б. Дополнительный вариант Слабые и больные люди могут выпить воду с лимонным соком и солью, как было указано выше, выполнить Сахаджа-випарита-карани, Йога-мудру, Павана-муктасану, Ардха-курмасану и поочередное поднимание ног в Шалабхасане. Действие.

Из книги Соблазнение автора Сергей Огурцов

Метод №4: Шок Этот метод основывается на разрушении ее привычных стереотипов.В этом случае вы говорите с железными интонациями Арнольда Шварценеггера в роли Терминатора:»Непривлекателен? А разве кто-то говорил, что я должен быть привлекателен для тебя? Меня это мало

Из книги Гимнастика для внутренних органов автора Виктория Владимировна Мазовецкая

Глава 7. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ КОМПЛЕКС УПРАЖНЕНИЙ Наше тело все время говорит с нами. Если бы мы только нашли время его послушать! Л.Хей УПРАЖНЕНИЯ ДЛЯ УКРЕПЛЕНИЯ ЖЕНСКИХ ИНТИМНЫХ МЫШЦУпражнения, о которых речь пойдет ниже, предназначены для женщин, так что мужчины могут

Из книги Плоскостопие. Самые эффективные методы лечения автора Александра Васильева

Дополнительный комплекс процедур, применяемых при лечении плоскостопия Остеопатия – это мягкая, щадящая техника, которая направлена прежде всего на восстановление нормальной механики опорно-двигательного аппарата, а также на снятие патологического напряжения,

Из книги Красота и здоровье женщины автора Владислав Геннадьевич Лифляндский

Дополнительный уход Дополнительный уход – это то, что необходимо делать не реже одного раза в неделю. К процедурам дополнительного ухода относятся применение косметических средств по уходу за кожей лица, тела, шеи, декольте; процедуры для ухода за волосами и

Из книги Йога и сексуальные практики автора Ник Дуглас

Дополнительный словарь терминов, используемых для обозначения половых органов Китайские термины Мужской орган Верный Слуга Вершина Радости Вершина Ян Меч Орудие Оружие Любви Оруженосец Парень Посол Птица Малиновка Разбойник Плод Черепаха Яшмовая Флейта Яшмовый

Твердофазный ИФА — вариант теста, когда один из компо­нентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или анти­генов. При положительном результате изменяется цвет хромоге­на. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,

При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сы­воротку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, ме­ченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.

II. При определении антигена (правый рисунок) в лунки с сорби­рованными антителами вносят антиген (напр. сыворотку кро­ви с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыво­ротку против него и вторичные антитела (против диагностиче­ской сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хро­моген для фермента.

Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки.

Другой тест — конкурентный ИФА для определения антител: искомые анти­тела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с дру­гом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Иммуноблоттинг — высокочувстви­тельный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг ис­пользуют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.

Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофоре­за в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагуили нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антиге­нов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител боль­ного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов челове­ка, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

52. Интерфероны, природа. Способы получения и применения.

Интерферон относится к важным защитным белкам иммунной системы. Открыт при изучении интерференции вирусов, т. е. явления, когда животные или культуры клеток, инфициро­ванные одним вирусом, становились нечувствительными к заражению другим вирусом. Оказалось, что интерференция обусловлена образующимся при этом белком, обладаю­щим защитным противовирусным свойством. Этот белок назвали интерфероном.

Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединительной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделяют три типа: α, β и γ-интерфероны.

Альфа-интерферон вырабатывается лейкоцитами, и он получил название лейкоцитарного;бета-интерферон называют фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами — клетками соединительной ткани, агамма-интерферон — иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.

Интерферон синтезируется в организме постоянно, и его концентрация в крови де­ржится на уровне примерно 2 МЕ/мл (1 международная единица — ME — это количество интерферона, защищающее культуру клеток от 1 ЦПД 50 вируса). Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании вирусами, а также при воздействии индукторов интерферона, например РНК, ДНК, сложных полимеров. Такие индукторы интерферона получили названиеинтерфероногенов.

Помимо противовирусного действия интерферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размножение) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действия интерферона сложен. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со специальными рецепторами клеток и оказывает влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Применение интерферона . Действие интерферона тем эффективнее, чем раньше он начинает синтезироваться или поступать в организм извне. Поэтому его используют с профилактической целью при многих вирусных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепатиты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и заболеваний, связанных с иммунодефицитами.

Интерфероны обладают видоспецифичностью, т. е. интерферон человека менее эффективен для животных и наоборот. Однако эта видоспецифичность относительна.

Получение интерферона . Получают интерферон двумя способами: а) путем инфицирования лейкоцитов или лимфоцитов кро­ви человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конструируют из него препараты интерферона; б) генно-инженерным способом — путем выращивания в производственных условиях рекомбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон. Обычно используют рекомбинантные штаммы псевдомонад, кишечной палочки со встроенными в их ДНК генами интерферона. Интерферон, полученный генно-инженерным способом, носит название рекомбинантного. В нашей стране рекомбинантный интерферон получил официальное название «Реаферон». Производство этого препарата во многом эффективнее и дешевле, чем лейкоцитарного.

Рекомбинантный интерферон нашел широкое применение в медицине как профилактическое и лечебное средство при вирусных инфекциях, новообразованиях и при иммунодефицитах.

Иммуноблоттинг – диагностическое мероприятие, проводимое в лабораторных условиях, по результатам которого выявляют антитела к возбудителям различных заболеваний. Одним из таковых выступает вирус иммунодефицита человека. Сразу стоит отметить, что такое исследование, как иммуноблоттинг на ВИЧ – это дополнительное мероприятие, которое назначают для подтверждения положительного результата ИФА.

В каких случаях назначается анализ

Вирус иммунодефицита человека – медленно прогрессирующая инфекция. Со времени проникновения в организм патогенов и до проявления первой симптоматики часто проходит достаточно продолжительное время, которое может достигать нескольких лет.

На начальном этапе развития клинические проявления могут отсутствовать. Повышение общей температуры, недомогание, боль в горле, характерные ВИЧ-инфекции симптомы, человек путает с банальной простудой, а ведь инфекция продолжает прогрессировать. Поэтому специалисты ВИЧ-центров рекомендуют пройти комплексную диагностику в таких случаях:

  • если случился незащищенный половой акт с новым партнером;
  • если одноразовый медицинский шприц или иглу использовали повторно;
  • если недавно была нанесена татуировка или проведен пирсинг;
  • если обнаружена другая инфекция, путь передачи которой – половой (например, сифилис, бактериальный вагиноз, гонорея);
  • если произошел контакт с инфицированным человеком.

Иммуноблот на ВИЧ проводится с использованием сыворотки или плазмы крови. Исследование на одном стрипе требует 1,5-2 мл крови или 15-25 мкл сыворотки.

Диагностическое мероприятие позволяет выявить антитела не только к вирусу иммунодефицита человека, но и к другим патогенам. В ходе исследования используют специальные наборы, характерные для различных заболеваний, например:

  • ВПГ1 и ВПГ2 IgM/IgG (для выявления герпесвирусной инфекции);
  • TORCH-профиль IgM (для выявления токсоплазмоза, краснухи, цитомегаловирусной инфекции, ВПГ 1 и ВПГ 2);
  • ВЭБ IgMTIgG (для выявления вирусной инфекции Эпштейн-Барр);
  • ВГС IgG (для выявления вирусного гепатита типа С).

Результат иммуноблоттинга может быть положительным (когда обнаружены антитела) и отрицательным (когда антитела в биологическом материале отсутствуют), а также неопределенным, ложноположительным и ложноотрицательным.

Где можно провериться на заражение вирусом, и что делать дальше

Каждая поликлиника, частная лаборатория, больница, клиника специализируется на подобном диагностическом мероприятии. Пройти тест можно в центре тестирования ВИЧ. Некоторые частные клиники предлагают услуги по консультированию и тестированию вируса СПИДа и ВИЧ на дому.

Рекомендуется провести один тест спустя 6 недель после предполагаемого заражения и спустя 12 недель. Пройти диагностику разрешается и в более поздний срок: на результат это не влияет.

ВАЖНО! После получения результатов исследования нужно обратиться к лечащему врачу для назначения соответствующей терапии.

Положительные пробы

Если результаты иммуноблота положительные, это еще не значит, что в организме развивается ВИЧ-инфекция. Для подтверждения диагноза назначают иные исследования, например, непрямую иммунофлюоросценцию.

Хоть метод иммуноблота и обладает высокой чувствительностью, однако, за счет определения иммуноглобулинов класса G возможен ложноположительный результат в первые 3 недели после инфицирования. В таком случае проводится тест повторно спустя определенное время.

Все причины получения ложноположительного результата неизвестны. Наиболее распространенными источниками выступают период беременности и недавнее введение вакцины иммунопрепарата. Если по истечении определенного времени после воздействия подобных факторов иммуноблот на ВИЧ все так же положительный, это означает, что человек инфицирован.

Негативный результат

Иммуноблот может давать отрицательный результат, что сигнализирует об отсутствии в организме антител к ВИЧ-инфекции и, как следствие, – о полном здоровье.

Отрицательный иммуноблот часто наблюдается в «период окна» (в первые 3 месяца между инфицированием и появлением в крови антител). На протяжении данного срока тест не обнаруживает соответствующие антитела, но в иной жидкости (сперме, влагалищном отделяемом) можно выявить таковые и в большом объеме.

Как проводится анализ

Иммуноблот позволяет идентифицировать антитела путем исследования крови и применения гель-электрофореза.

В первую очередь проводится разрушение бактериальных клеток или вирионов ультразвуком, после чего путем электрофореза – разделение всех антигенов вируса или бактериальных клеток. В итоге получается коммерческий реагент, помещаемый на специальную нитроцеллюлозную пленку.

Во время постановки иммуноблоттинга на материал с известным антигеном наносят и исследуемую сыворотку. После того, как провели инкубацию и отмывание несвязавшихся антител, начинают иммуноферментный анализ, наносят на сыворотку иммуноглобулины, которую помечают ферментом, и хромогенный субстрат, меняющий цвет при контакте с ферментом.

Если имеются антитела, на носителе образуются пятна.

Для проведения иммуноблоттинга на ВИЧ используется забор крови

Линейный блот на ВИЧ – непрямое иммунологическое исследование, методом которого получают качественный показатель аутоантител класса IgG.

В ходе иммунологического исследования используют вирусное вещество ВИЧ-формата или антигены. В лабораторных условиях соединяют белки ВИЧ и отдельные антитела, которые были получены из сыворотки крови. Далее проводится инкубация путем добавления меченых антител и человеческого иммуноглобулина.

Диагностика ВИЧ у новорожденных

В организме ребенка до 9 месяцев, рожденного от инфицированной женщины, присутствуют антитела к ВИЧ матери, что становится причиной получения ложноположительного результата ИФА. По этой причине предпочтение отдают вирусологическим тестам – количественному анализу РНК и ДНК ПЦР. Более чувствителен культуральный метод диагностики инфекции.

ВАЖНО! Показаниями к проведению диагностических мероприятий по выявлению ВИЧ-инфекции у новорожденных выступают: рождение от инфицированной женщины, получение сомнительного результата ранее осуществимого анализа.

Исследование при беременности

Так как ВИЧ-инфекция, развивающаяся у беременной женщины, может передаться будущему ребенку, требуется ранняя диагностика на вирус иммунодефицита.

В первую очередь проводится иммуноферментный анализ, применяемый в качестве скрининга. Диагностическое мероприятие помогает обнаружить в сыворотке крови антитела к инфекции. Несмотря на точные результаты анализа в период беременности, требуется повторное проведение исследования.

Разновидность ИФА – иммунный блоттинг, который часто используют в период беременности. По результатам диагностики можно выявить антитела к определенным антигенам, которые распределены по молекулярному весу методом электрофореза.

Как правильно пройти тест

Иммунный блоттинг на ВИЧ требует специальной подготовки, как и другие методы диагностики заболевания. Если провести некоторые исследования и получить результаты определенных показателей можно на протяжении всего дня (например, ответ на аллерген), то сдавать кровь на иммунологический анализ нужно только в утреннее время.

В предыдущий день перед диагностикой рекомендуется окончить повышенные физические нагрузки. Биологический материал сдают на голодный желудок. Как правило – это кровь с вены, которую в некоторых случаях забирают в несколько пробирок.

Расшифровка результатов

Расшифровку результатов иммуноблотта проводит лабораторный работник. Если обнаружили 2 из 3 протеинов ВИЧ-1 или ВИЧ-2, это указывает на присутствие в организме соответствующей инфекции. Исследование проводится для подтверждения положительного иммуноферментного анализа. Поэтому реакция проверяется и на такие протеины, как gp120/160, gp41 в сочетании с р24. Последние – это часть трех генов СПИДа – gag pol and env.

Схематическое отображение результатов иммуноблоттинга на ВИЧ

Первичная диагностика предполагает исследование белков р25, gp110/120 и gp160, указывающих на раннюю стадию развития заболевания. При положительном результате, который дал второй серологический иммуноферментный анализ, проводится иммуноблот. Если и последний дал положительный результат, диагноз ВИЧ подтверждают.

Вероятность положительного результата зависит от периода, который прошел от момента инфицирования до проведения диагностики:

  • спустя 28 дней – 60-65%;
  • спустя 42 дня – 80%;
  • спустя 56 дней – 90%;
  • спустя 84 дня – 95%.

Ложноположительный результат возможен, если забор биологического материала для дальнейшей диагностики проводился в период беременности, при нарушении гормонального фона, продолжительном подавлении иммунной функции определенными препаратами, которые принимает человек.

Критерии оценки анализа

Результаты анализа ИФА и иммуноблоттинга должны соответствовать следующим критериям:

  • блот исследуемого биологического материала совпадает с блотом образца сравнения;
  • молекулярная масса основного выявленного компонента соответствует требованиям спецификации.

Результаты полученные в специализированной лаборатории будут наиболее точными

Выявляемая примесь и ее содержание должны отвечать требованиям свидетельства на стандартный образец.

Неинтерпретируемые результаты

В некоторых случаях иммуноблоттинг на ВИЧ и СПИД не соответствует отрицательному и положительному результату, причем врач не может определить истинную причину сомнительных сведений. Часто причиной неправильной интерпретации выступает инфицирование, вызванное другим серотипом.

Для устранения сомнений ПЦР и ИФА проводятся в динамике. При отсутствии характерной заболеванию симптоматики на протяжении полугода и факторов риска говорят о полном здоровье. На этом этапе диагностические мероприятия оканчивают.

Сомнительный результат также можно получить при развитии в организме иного инфекционного заболевания, ракового новообразования, аллергической реакции.

Важно! При сомнительном результате человек не может быть донором крови и другого биологического материала.

Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:

  1. Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
  2. Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
  3. Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
  4. Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
  5. Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.

Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.

Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.

Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:

  • неправильный забор биологического материала;
  • неправильное хранение биоптата;
  • неправильная транспортировка диагностических систем;
  • длительное хранение тест-системы.

На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.

После получения результатов исследования лабораторный работник должен выдать для врача заключение. Если диагностика проводилась в «период окна», он назначает повторное проведение диагностики спустя определенное время. В любом случае, чтобы поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», одного иммуноблота недостаточно. Необходима комплексная диагностика.

ИММУНОБЛОТ (western blot) — метод лабораторного исследования сыворотки крови на присутствие антител к ВИЧ; это более точный анализ, чем ИФА, и используется для подтверждения результатов ИФА. ИФА — иммуноферментный анализ (ELISA) -лабораторное исследование, позволяющее определить присутствие в крови ВИЧ-антител; тест на ВИЧ-антитела.

По рекомендации ВОЗ иммуноблотинг (вестерн-блот) используется при диагностике ВИЧ-инфекции в качестве дополнительного экспертного метода, который должен подтверждать результаты ИФА . Обычно этим методом перепроверяют положительный результат при ИФА, поскольку он считается более чувствительным и специфичным, хотя более сложным и дорогим.

Иммунный блоттинг сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим разделением белков вируса в геле и их переносом на нитроцеллюлозную мембрану. Процедура иммуноблота состоит из нескольких стадий (). Сначала предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов ВИЧ подвергается электрофорезу, при этом все входящие в состав вируса антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга антигены переносят из геля на полоску нитроцеллюлозы или нейлонового фильтра, которые отныне содержат невидимый пока глазом спектр белков, характерный для ВИЧ. Далее на стрип наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им полосками белков-антигенов. В результате последующих манипуляций (подобных ИФА) результат этого взаимодействия визуализируется — делается видимым. Наличие полос на определённых участках стрипа подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

Иммунный блоттинг чаще всего используют для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции. ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум белкам оболочки ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp160, gp120 , gp41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, с использованием набора другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, исследования продолжаются через каждые 3 месяца.

Для проведения иммуноблотинга на первом этапе белки, содержащиеся в сыворотке крови, разделяют в геле по их молекулярной массе и заряду с помощью электрического поля (методом электрофореза в геле). Затем на гель накладывают нитроцеллюлозную или нейлоновую мембрану и «промокают» (это и есть блоттинг). Это осуществляют в специальной камере, которая позволяет осуществить полный пернос материала из гела на мембрану. В результате та картина расположения белков, которая была на геле, воспроизводится на мембране (блот), с которой можно далее легко манипулировать. Первоначально мембрану обрабатывают антителами к искомому антигену, а после отмывки несвязанного материала, добавляют радиоактивно меченный коньюгат, который специфически связывается с антителами (как в ИФА). Местоположение образующегося комплекса антиген — антитело — меченый коньюгат определяют с помощью авторадиографии с использованием рентгеновской пленки. После ее проявления все становится ясным, есть антигены в крови или их нет.

Что это такое — иммуноблот? Это распространенный метод лабораторной диагностики вирусных инфекций человека. Его считают одним из самых точных и достоверных способов выявить наличие ВИЧ. По своей надежности он превосходит даже иммуноферментный анализ (ИФА). Результаты иммуноблота считаются неопровержимыми и окончательными.

Где сделать анализ?

Где можно сдать анализ на ВИЧ? ИФА, иммуноблот исследования проводят в городских частных клиниках, результаты выдают в течение суток. Возможна и срочная диагностика. В государственных медицинских учреждениях анализы ИФА и иммуноблоттинг проводят бесплатно, согласно законодательству РФ. В обязательном порядке проверку на инфекционные заболевания проходят беременные женщины, а также пациенты, которым предстоит госпитализация или оперативное вмешательство.

Самые распространенные методы диагностики инфекции ВИЧ — это иммуноферментный анализ и иммуноблот. Они ипользуются для определения в сыворотки крови антител к вирусу иммунодефицита. Наличие инфекции обычно подтверждают двумя тестами: скрининговым и подтверждающим. Интерпретация результатов исследования должна проводиться врачом, он же ставит диагноз и назначает лечение. Если иммуноблот положительный, это означает, что в организме человека присутствует вирус.

Положительный результат не должен стать поводом для самостоятельного лечения, так как у каждого пациента может быть своя картина заболевания. Качественный анализ включает скрининговый и вертификационный. Если у пациента не обнаружен вирус, то в результате указывают «отрицательно». При обнаружении методом скрининга проводят дополнительное вертификационное исследование. Иммуноблот — это анализ, который подтверждает или опровергает скрининг. Если на тест-полоске появляются потемнения на определенных участках (места локализации белков), ставят диагноз «ВИЧ». Если результаты вызывают сомнения, анализы проводят в течение трех месяцев.

Не допустить заражение вирусом иммунодефицита можно, если соблюдать определенные правила: избегайте случайных половых связей, используйте презерватив во время контактов, не принимайте наркотики. Если болезнь обнаружена у беременной женщины, важно четко соблюдать рекомендации лечащего врача, не забывать проходить обследования на предмет наличия вируса.

Сыворотка крови пациента вносится в лунку планшета, к стенкам которой прикреплены белки или фрагменты белков ВИЧ. Эти белки прочно взаимодействуют с антителами к ВИЧ, если таковые имеются в исследуемой сыворотке. Далее, к каждой молекуле антител к ВИЧ, «выловленной» из сыворотки пациента, прикрепляется фермент, который делает эти антитела видимыми, изменяя окраску раствора в лунке: чем больше в сыворотке антител, тем темнее окраска в лунке планшета. С этого момента начинается процесс подтверждения положительного результата. На первом этапе исследование данной сыворотки повторяют в той же тест-системе в двух лунках — это позволяет исключить технические погрешности. Если результат подтвердился — наступает второй этап. Исследование проводится в двух других тест-системах ИФА, «отсеивающие» ложноположительные результаты. Если хотя бы в одной из этих тест-систем получен положительный результат — начинается третья стадия высокоспецифичного метода иммуноблотинга — теста, подтверждающего наличие ВИЧ-инфекции.

Поскольку исследования проводятся поэтапно, то время до получения результата может составить от 1 до 10 дней.

Варианты результатов:

  • «Иммуноблот отрицательный» — значит, что положительная реакция в ИФА — тестах была ложной или неспецифической, ВИЧ-инфекции нет.
  • «Иммуноблот положительный» — в крови обнаружены антитела к ВИЧ, необходим четвертый, последний этап — повторный забор крови с документом удостоверяющем личность (паспортом) в центре Анти-СПИД и повторное исследование, чтобы исключить техническую ошибку при заборе крови. Только после положительного результата по повторной сыворотке подводится окончательный итог — «антитела к ВИЧ — обнаружены», у человека — ВИЧ-инфекция.
  • «Иммуноблот сомнительный» . Это означает, что сыворотка реагирует не со всеми, а с какими-то отдельными белками ВИЧ, нанесенными на нитроцеллюлозные полоски блота, т. е определяется только часть антител к белкам ВИЧ. Неопределенный результат может означать, что человек инфицирован ВИЧ, но еще не весь спектр антител выработан организмом. Нередко по прошествии 1-3-6 месяцев с момента получения сомнительного результата в сыворотке появляются одно за другим все антитела и ВИЧ. В этом случае сомнительный результат — свидетельство начальной стадии ВИЧ-инфекции. Или же, результат неопределенного иммуноблота показывает, что человек не инфицирован, но в его организме есть антитела похожие на истинные антитела к ВИЧ. Такой результат может быть у больных туберкулезом, онкобольных, реципиентов, получающих многократные гемотрансфузии (переливания крови), у беременных женщин. При неопределенном результате ИБ пациент находится под наблюдением врача-инфекциониста и повторяет анализ.

Проходя тестирование в Ханты-Мансийском центре по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями граждане РФ имеют возможность обследоваться на ВИЧ анонимно и бесплатно, получить полное консультирование у инфекционистов и психологов как до, так и после прохождения теста.

Существует методика, позволяющая определять не антитела к вирусу ВИЧ, а сам вирус в организме, это методика ПЦР — полимеразной цепной реакции. Она доказала свою эффективность и используется для:

определения наличия или отсутствия самого ВИЧ в «период окна», при неясном результате иммуноблота;

для определения необходимости назначения лечения и контроля лечения;

для определения ВИЧ-статуса новорожденных, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей.

ПЦР позволяет определить совсем незначительное количество вирусных частиц в зараженном материале. Проведение ПЦР требует сложного лабораторного оборудования и высокой квалификации специалистов. Метод очень дорогостоящий и в массовом тестировании на ВИЧ, которое согласно законодательству проводится для населения бесплатно, не применяется.

В экстренных ситуациях (во время родов, операций по жизненным показаниям) применяют «экспресс-тесты». Их проведение не требует сложного оборудования и высокой квалификации персонала. Результат экспресс-теста необходимо подтверждать стандартным тестированием на ВИЧ.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *